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分枝杆菌属是一类极为古老的革兰氏阳性细菌属，它具有不同于别的细菌的细胞壁结构，其靠近细胞膜的部分是其他革兰氏阳性细菌都具有的肽聚糖(peptidoglycan)层，该层通过磷酸二酯键与分枝酸-阿拉伯半乳糖-肽聚糖复合层(MAPc)共价连接。分枝酸是含70～90个碳原子的枝链脂肪酸，位于MAPc的外层，分枝杆菌因此而得名。MAPc层之外为糖化脂质层(glycolipid)，它与分枝酸相连，成分主要是磷脂，占细胞壁干重的比例高达60%，所以分枝杆菌疏水性很强，不能使用革兰氏染色。分枝杆菌细胞壁还含有贯穿整个细胞壁的脂阿拉伯糖甘露聚糖(LAM)，它是一种含阿拉伯糖和甘露糖的磷酸化的、不均一混合物，其末段所连接的成分的不同与细菌对巨噬细胞反应的不同密切相关。分枝杆菌细胞壁的上述特点使得用常规方法纯化其DNA非常困难。本试剂盒就是为解决这一问题而开发的。

• 操作简单，客户不需要准备额外的试剂。
  
• 本试剂盒适用于整个分枝杆菌属。
  
• 获得的基因组DNA足够进行后续的核酸扩增或酶切处理。PCR检测灵敏度一般在10～100 CFU/mL样品。
  
• 既可以使用培养的分枝杆菌，也可以使用从痰液、精液、血液、脑脊液等样品中分离的分枝杆菌。
  
• 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关要求进行消毒处理。

• 刮取培养皿培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
  
• 80℃放置20分钟以杀灭分枝杆菌。
  
• 3000g室温离心15分钟，弃上清。
  
• 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。

• 将痰液样品(0.5mL～2mL)加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
  
• 加2mL的自备蒸馏水，再加入100mg化痰液干粉，充分混合均匀后室温放置15～30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间30分钟。
  
• 3000g室温离心15分钟，弃上清。
  
• 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。

• 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理（可另购本公司红细胞裂解液产品）。
  
• 将得到的白细胞沉淀放-20℃或更低温度放置10分钟。
  
• 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
  
• 上述处理将使大部分白细胞破裂，加入自备的TE到离心管体积的一半位置。
  此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。
  
• 离心5～10分钟沉淀分枝杆菌，离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5mL离心管，则可以12000～15000g室温离心。如果样品在10～15mL离心管，则3000～5000g室温离心。
  
• 吸弃上清(含白细胞DNA)，将所得分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。

• 将150μL 65℃预热过的DNA提取液A加到有分枝杆菌沉淀的螺旋盖离心管中，充分震荡混匀。
  
• 将混合物转移到一个干净的1.5mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管，否则后面处理过程溶液容易漏出。
  
• 加入300μL DNA提取液B和300μL自备氯仿，充分震荡混匀。
  
• -20℃放置直到液体凝固，一般需要30分钟。过夜放置也可。也可以-80℃放置10分钟直到液体凝固。
  
• 放室温融化后振荡半分钟。
  
• 12000～15000g室温离心3～5分钟，小心转移全部上清到一个新离心管中。
  
• 加入等体积的DNA提取液C，颠倒混匀。
  
• 将液体转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
  
• 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
  
• 加入0.5mL通用洗柱液12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
  
• 重复上步的洗涤过程一次。
  
• 短暂离心半分钟。此步不要省略，否则残留的洗柱液（含乙醇）将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
  
• 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入50μL DNA洗脱液2.0，12000～15000g室温离心半分钟，所得溶液即分枝杆菌基因组DNA。
  
• 直接取5～10μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用或用于后续反应。