产品货号：
BTN70703
中文名称：
柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒
英文名称：
Mycobacteria DNA column extraction kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
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分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类极为古老的革兰氏阳性细菌属，它具有不同于别的细菌的细胞壁结构，其靠近细胞膜的部分是其他革兰氏阳性细菌都具有的肽聚糖（peptidoglycan）层，该层通过磷酸二酯键与分枝酸-阿拉伯半乳糖-肽聚糖复合层（MAPc）共价连接。分枝酸是含70～90个碳原子的枝链脂肪酸，位于MAPc的外层，分枝杆菌因此而得名。MAPc层之外为糖化脂质层（glycolipid），它与分枝酸相连，成分主要是磷脂，占细胞壁干重的比例高达60%，所以分枝杆菌疏水性很强，不能使用革兰氏染色。分枝杆菌细胞壁还含有贯穿整个细胞壁的脂阿拉伯糖甘露聚糖（LAM），它是一种含阿拉伯糖和甘露糖的磷酸化的、不均一混合物，其末段所连接的成分的不同与细菌对巨噬细胞反应的不同密切相关。分枝杆菌细胞壁的上述特点使得用常规方法纯化其DNA非常困难。本产品就是为解决这一问题而开发的产品。
保存：RT，其中化痰液成分(干粉)和DNA提取液B需要4℃保存，有效期一年。
TE缓冲液，氯仿。
注意：文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关要求进行消毒处理。
一、培养的分枝杆菌样品的预处理
二、含分枝杆菌的痰液样品的预处理
三、含分枝杆菌的血液样品的预处理
四、分枝杆菌基因组DNA的提取
相关搜索：柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒，分枝杆菌DNA提取试剂盒，Mycobacteria DNA column extraction kit
- 操作简单，客户不需要准备额外的试剂。
- 适用于整个分枝杆菌属。
- 获得的基因组DNA足够进行后续的核酸扩增或酶切处理。PCR检测灵敏度一般在10-100 CFU/mL样品。
- 既可以使用培养的分枝杆菌，也可以使用从痰液、精液、血液、脑脊液等样品中分离的分枝杆菌。
- 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。
- 本产品只能用于科研。
| 成分 | 规格 |
| DNA提取液A | 7.5mL |
| DNA提取液B | 15mL |
| DNA提取液C | 30mL |
| 化痰液成分(干粉) | 5g |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脱液2.0 | 10mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
保存：RT，其中化痰液成分(干粉)和DNA提取液B需要4℃保存，有效期一年。
TE缓冲液，氯仿。
注意：文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关要求进行消毒处理。
一、培养的分枝杆菌样品的预处理
- 刮取培养皿培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
- 80℃放置20分钟以杀灭分枝杆菌。
- 3000g室温离心15分钟，弃上清。
- 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。
二、含分枝杆菌的痰液样品的预处理
- 将痰液样品(0.5mL～2mL)加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
- 加2mL的自备蒸馏水，再加入100mg化痰液干粉，充分混合均匀后室温放置15～30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间30分钟。
- 3000g室温离心15分钟，弃上清。
- 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。
三、含分枝杆菌的血液样品的预处理
- 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理（可另购本公司红细胞裂解液产品）。
- 将得到的白细胞沉淀放-20℃或更低温度放置10分钟。
- 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
- 上述处理将使大部分白细胞破裂，加入自备的TE到离心管体积的一半位置。
此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。 - 离心5～10分钟沉淀分枝杆菌，离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5mL离心管，则可以12000～15000g室温离心。如果样品在10～15mL离心管，则3000～5000g室温离心。
- 吸弃上清(含白细胞DNA)，将所得分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。
四、分枝杆菌基因组DNA的提取
- 将150μL 65℃预热过的DNA提取液A加到有分枝杆菌沉淀的螺旋盖离心管中，充分震荡混匀。
- 将混合物转移到一个干净的1.5mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管，否则后面处理过程溶液容易漏出。
- 加入300μL DNA提取液B和300μL自备氯仿，充分震荡混匀。
- -20℃放置直到液体凝固，一般需要30分钟。过夜放置也可。也可以-80℃放置10分钟直到液体凝固。
- 放室温融化后振荡半分钟。
- 12000～15000g室温离心3～5分钟，小心转移全部上清到一个新离心管中。
- 加入等体积的DNA提取液C，颠倒混匀。
- 将液体转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
- 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加入0.5mL通用洗柱液12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 重复上步的洗涤过程一次。
- 短暂离心半分钟。此步不要省略，否则残留的洗柱液（含乙醇）将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
- 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入50μL DNA洗脱液2.0，12000～15000g室温离心半分钟，所得溶液即分枝杆菌基因组DNA。
- 直接取5～10μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用或用于后续反应。
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